2018-5-17 星期四

簡要介紹

  基因編輯平臺為2016年7月新成立的平臺,目前平臺正在建設中,主要由普通分子實驗室和二級生物安全實驗室構成。平臺的工作為主要包裝慢病毒和腺相關病毒,并且將其濃縮純化,以期獲得高濃度高質量的工具病毒,為全所尤其是非人靈長類疾病模型研究提供服務。同時也將建造和管理符合國家標準的二級生物安全實驗室,以保障實驗人員在實驗過程中的安全和減少對外界環境的影響。 

  病毒系統在神經學研究中是一種重要的工具,因為其制作簡單成本不高,基因可長期穩定表達等優點而被廣泛使用。而最常用的為慢病毒和腺相關病毒(AAV)。 

  1) 慢病毒載體改造自人免疫缺陷病毒(HIV),對于分裂細胞和非分裂細胞均具有感染能力。慢病毒載體可以將外源基因或外源的shRNA有效地整合到宿主染色體上,從而達到持久性表達目的序列的效果。慢病毒在感染能力方面可有效地感染神經元細胞、肝細胞、心肌細胞、腫瘤細胞、內皮細胞、干細胞等多種類型的細胞。慢病毒較之其他病毒載體而言,具有基因容量大的特點,最大的DNA片段裝載量為8~9kb,而腺相關病毒僅為4kb。不過它的擴散能力不如腺相關病毒,不適用于整體注射。 

  2) 腺相關病毒(AAV)一種復制缺陷型細小病毒,其增殖復制需要腺病毒或皰疹病毒的輔助。目前常用的AAV無輔助病毒系統(AAV Helper-Free System)可以在無輔助病毒的條件下生產出重組人腺相關病毒,因此這種方法更安全和便利。AAV對分裂細胞和非分裂細胞均具有感染能力。 在人類和小鼠中,AAV感染可以介導外源基因發生低頻率(不高于2%)的定向整合。病毒基因組在不發生整合的情況下在被感染細胞內形成伴隨體,可以隨染色體復制。因此無論整合的外源DNA還是不整合的外源DNA都可以在細胞核內穩定的復制和轉錄,產生RNA產物和蛋白產物。可以有效地感染多種組織類型,并且免疫原性極低,目前尚無由AAV引起的人類及哺乳動物疾病報道。尤其在整體水平研究中,與其他常用病毒工具載體相比,AAV病毒顆粒小,擴散性能好,并且具有長效的表達能力(>6個月),所以是一種強有力的工具。其主要的應用方向在于定位注射和整體注射。 

  目前基因編輯平臺正在積極籌備中,平穩后期待能為所內各位同仁們提供有力的技術支持。 

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